产品简介

衍生化的主要目的是提高目标物质的可检测性，从而增强检测器对目标物质的响应。在弱碱性溶液中，OPA和3-MPA能够与氨基酸中的羰基与氨基反应，形成衍生物。经过紫外光激发后，这些衍生物会发射出比激发光波长更长的荧光。衍生物的荧光强度与其浓度成正比，从而能够计算样品中氨基酸的含量。这种方法具有快速、准确和高灵敏度的优点，并且适用范围广泛。

货号名称规格储存条件
尊龙凯时 SDK1010氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）25T/50T 2-8℃
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组分

实验步骤：

1. 流动相A的配制：取适量超纯水分别溶解流动相A1、A2和A3，溶解后移至1L容量瓶中，并用超纯水冲洗流动相瓶壁1-2次，确保试剂充分溶解。最后，将容量瓶定容至1L，混匀后通过022μm有机相膜备用。

2. 流动相B的配制：取适量超纯水溶解流动相B，移至1L容量瓶中，并用超纯水冲洗瓶壁1-2次，然后加入400mL的色谱级甲醇和400mL的色谱级Y腈。最终用超纯水定容至1L，混匀后通过022μm有机相膜备用。

3. 将配制好的流动相A和B超声处理30分钟，以去除溶剂中的气体，防止色谱柱堵塞。

4. 标准溶液的配制：用户需自备标准品，取一定量的氨基酸标准品，使用01MHCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，通过022μm水相膜过滤。

5. 衍生试剂的配制：取60mg试剂一，加入0.5mL试剂二、45mL试剂三和50μL试剂四，避光混匀后备用。按此比例可获得约5mL的衍生化试剂，适用于25次手动衍生，具体配制量可根据需求调整。

6. 开启电脑及液相色谱仪的各模块开关（使用FLD检测器），并安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%）。打开软件，设置柱温为35℃，流速为1mL/min，激发波长（λex）为340nm，发射波长（λem）为450nm，设置洗脱程序并保存方法组。

7. 进样前，需用初始流动相平衡色谱柱，比例为流动相A：流动相B=90:10，平衡30分钟或更久，待基线稳定后开始进样。

8. 自动衍生（进样程序的设定）：吸取氨基酸标准溶液1μL，2μL衍生试剂、2μL试剂三，进行快速混合并等待1分钟后进样。

9. 若色谱仪无自动衍生功能，手动操作时可吸取氨基酸标准溶液100μL，加入200μL衍生试剂和200μL试剂三，充分混合后静置1分钟，并过022μm有机相膜后上样。

10. 为了排除干扰，需要同时进行空白对照，使用等量01MHCl重复上述步骤。

检测结果示例

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